Preview

Клиническая и экспериментальная тиреоидология

Расширенный поиск

Хемилюминесцентная и энзиматическая активность нейтрофилов крови у пациентов с болезнью Грейвса в зависимости от компенсации гипертиреоза

https://doi.org/10.14341/ket12717

Содержание

Перейти к:

Аннотация

ОБОСНОВАНИЕ. Оксидативный стресс при болезни Грейвса может потенцировать цитотоксичность нейтрофилов и поддерживать аутоиммунное воспаление. Ликвидация гипертиреоза при консервативной терапии тиамазолом лишь в некоторых случаях приводит к стойкой ремиссии, что предопределяет необходимость поиска новых иммунологических маркеров для разработки этиотропных терапевтических подходов к лечению заболевания.

ЦЕЛЬ. Изучить хемилюминесцентную и энзиматическую активность нейтрофилов периферической крови у пациентов с болезнью Грейвса в зависимости от компенсации гипертиреоза для определения внутриклеточных мишеней иммунотропного лечения.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Оценку спонтанной и зимозан-индуцированной хемилюминесценции осуществляли на 36-канальном хемилюминесцентном анализаторе «БЛМ-3607» (ООО «МедБиоТех», Красноярск). Реактивность нейтрофилов периферической крови была охарактеризована следующими показателями: время выхода на максимум (Тmax — скорость развития хемилюминесцентной реакции), максимальное значение интенсивности (Imax — максимальный уровень синтеза активных форм кислорода (АФК)) и площадь под кривой хемилюминесценции (S — суммарный синтез АФК за 90 мин измерения). С помощью биолюминесцентного метода в нейтрофилах крови определяли активность NAD(P)-зависимых дегидрогеназ.

РЕЗУЛЬТАТЫ. В проспективное исследование были включены 126 женщин с лабораторно подтвержденной болезнью Грейвса в возрасте от 18 до 65 лет, из них 93 (73,81%) — с компенсированным и 33 (26,19%) — с некомпенсированным гипертиреозом. При некомпенсированном гипертиреозе показатель суммарного синтеза АФК спонтанной и зимозан-индуцированной люцигенин-зависимой хемилюминесценции нейтрофилов значительно возрастает как относительно контрольного диапазона, так и относительно значений, установленных у пациентов с компенсированным гипертиреозом. При антигенной стимуляции нейтрофилов в ходе люминол-зависимой хемилюминесценции у пациентов с рецидивом гипертиреоза зафиксировано более чем десятикратное увеличение суммарного синтеза АФК относительно контрольных значений, но не выявлены статически значимые различия с показателями пациентов с компенсированным гипертиреозом. Установлен высокий уровень активности NADH-зависимой реакции глутаматдегидрогеназы у пациентов с рецидивом гипертиреоза как относительно контрольного диапазона, так и показателей пациентов с болезнью Грейвса в состоянии медикаментозного эутиреоза.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ. Нарушения кислородного метаболизма нейтрофилов периферической крови у пациентов в состоянии медикаментозного эутиреоза преимущественно затрагивают первичное звено — продукцию супероксидных радикалов, что сопряжено с компенсацией гипертиреоза и иммуносупрессивным эффектом тиамазола. У пациентов с рецидивом гипертиреоза отмечаются более выраженные изменения в продукции высокоэнергетических оксидантов не только на начальном этапе окислительных реакций, но и на уровне продукции вторичных АФК, свидетельствующие об активации иммунологических механизмов клеточного реагирования.

Для цитирования:


Дудина М.А., Савченко А.А., Догадин С.А., Гвоздев И.И. Хемилюминесцентная и энзиматическая активность нейтрофилов крови у пациентов с болезнью Грейвса в зависимости от компенсации гипертиреоза. Клиническая и экспериментальная тиреоидология. 2022;18(1):4-14. https://doi.org/10.14341/ket12717

For citation:


Dudina M.A., Savchenko A.A., Dogadin S.A., Gvozdev I.I. The chemiluminescent and enzymatic activity of blood neutrophils in patients with Graves' disease depending on hyperthyroidism compensation. Clinical and experimental thyroidology. 2022;18(1):4-14. (In Russ.) https://doi.org/10.14341/ket12717

ОБОСНОВАНИЕ

В основе гипертиреоза аутоиммунного генеза при болезни Грейвса (БГ) лежит образование иммуноглобулинов класса G, которые связываются и стимулируют рецептор тиреотропного гормона (рТТГ) и являются единственным иммунологическим маркером рецидивирования заболевания [1]. Механизмы стимуляции иммунной системы при манифестации и рецидиве гипертиреоза на фоне тиреостатической терапии при болезни Грейвса до сих пор изучены не полностью [2]. У пациентов с БГ развивается стойкое аутоиммунное воспаление, эффективность которого определяет тяжесть течения, ответ на тиреостатическую терапию и рецидивирующее течение гипертиреоза [3]. Ликвидация гипертиреоза при консервативной терапии тиамазолом лишь в некоторых случаях приводит к стойкой ремиссии заболевания, а доля пациентов с рецидивом тиреотоксикоза даже на фоне поддерживающей дозы антитиреоидных препаратов остается высокой и варьирует, по данным разных авторов, от 37 до 70% [2][4]. Несмотря на органоспецифичность заболевания, все больше исследователей разделяют мнение, что неадекватный иммунный ответ против щитовидной железы при БГ реализуется на разных уровнях и инициирует длительный аутоиммунный процесс [5].

Окислительный стресс при БГ может привести к повреждению периферических тканей, способствуя как клиническому проявлению тиреотоксикоза, так и цитопатогенному воздействию на тиреоциты с последующей потерей аутотолерантности к собственным антигенам щитовидной железы [6]. Имеются противоречивые сообщения о том, что антитиреоидные препараты снижают уровень показателей окислительного стресса за счет восстановления эутиреоза и общего реактивного антиоксидантного потенциала плазмы [7]. С другой стороны, показано снижение общей антиоксидантной способности у пациентов со средней продолжительностью гипертиреоза 2,3±1,5 мес [8]. Но до сих пор остается неизученной радикал-продуцирующая способность нейтрофилов при консервативной терапии БГ в зависимости от компенсации гипертиреоза. Однако функционирование NADPH-оксидазного комплекса и интенсивность метаболических процессов в нейтрофилах периферической крови могут определять их функциональные возможности при развитии и последующем поддержании аутоиммунной реакции при БГ. Ограниченность наших знаний в функционировании метаболических каналов и свободнорадикального окисления клеток иммунной системы, которые могут потенцировать цитотоксичность нейтрофильных гранулоцитов при развитии и поддержании аутоиммунной реакции, предопределяет необходимость поиска новых маркеров для разработки этиотропных терапевтических подходов к лечению заболевания.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Изучить хемилюминесцентную и энзиматическую активность нейтрофилов периферической крови у пациентов с болезнью Грейвса в зависимости от компенсации гипертиреоза для определения внутриклеточных мишеней иммунотропного лечения.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Место и время проведения исследования

Место проведения. Исследование проводилось на базе эндокринологического центра КГБУЗ «Краевая клиническая больница» (г. Красноярск).

Время исследования. Наблюдение пациентов осуществлялось с 6 сентября 2020 г. по 6 сентября 2021 г.

Изучаемые популяции (одна или несколько)

Изучались две популяции: пациенты с БГ и здоровые индивиды (контроль).

Популяция «пациенты с болезнью Грейвса».

Критерии включения: женский пол, возраст от 18 до 65 лет, лабораторно подтвержденная БГ, постоянный, непрерывный прием тиамазола.

Популяция «контроль».

Критерии включения: женский пол, возраст от 18 до 65 лет, отсутствие отягощенного анамнеза по заболеваниям щитовидной железы у самой пациентки и кровных родственников, отсутствие структурных изменений по данным ультразвукового исследования щитовидной железы.

Критерии исключения: узловой/многоузловой токсический зоб, беременность, лактация, эндокринная офтальмопатия, новообразования, заболевания печени, системные заболевания соединительной ткани, сахарный диабет, другие заболевания органов эндокринной системы, курение и прием антиоксидантов, острые респираторные и вирусные инфекции, а также введение профилактических прививок в течение 2 мес, предшествующих иммунологическому и гормональному анализу.

Способ формирования выборки из изучаемой популяции (или нескольких выборок из нескольких изучаемых популяций)

Формирование подгрупп пациентов с БГ проводилось способом формирования выборки наблюдений в зависимости от компенсации гипертиреоза при условии непрерывной консервативной терапии тиамазолом.

Клинико-гормональное обследование пациентов с БГ проводилось при манифестации заболевания, до начала тиреостатической терапии, а также через 6 нед консервативной терапии тиамазолом, для оценки компенсации гипертиреоза. Через 3 мес от начала консервативной терапии тиамазолом, при приеме поддерживающей дозы тиреостатика всем пациентам проводилось контрольное клинико-иммунологическое обследование. Группы пациентов с компенсированным (медикаментозный эутиреоз) и некомпенсированным гипертиреозом (рецидив) были сформированы согласно критериям диагностики и протоколу консервативного лечения БГ национальных клинических рекомендаций [9]. Рецидивом гипертиреоза считалось изменение показателей тиреоидного статуса, соответствующих критериям субклинического или манифестного гипертиреоза, у обследуемых пациентов с ранее достигнутым и подтвержденным лабораторно медикаментозным эутиреозом.

Дизайн исследования

Проведено одноцентровое когортное сплошное открытое контролируемое исследование с участием пациентов с лабораторно подтвержденной БГ.

Материалы и методы

Клинические методы обследования включали объективный осмотр, пальпацию щитовидной железы, клинико-лабораторную оценку тиреоидного статуса и титра антител к рТТГ в сыворотке крови на момент манифестации гипертиреоза иверификации БГ, а также в динамике консервативного лечения тиамазолом. Методом хемилюминесцентного иммуноанализа на микрочастицах на автоматическом анализаторе Architect i1000sr (Abbott Diagnostics, США) определяли уровень ТТГ и свободного тироксина (св.Т4) в сыворотке крови, указанный референсный диапазон соответственно 0,4–4,0 мЕд/л и 9,01–19,05 пмоль/л. Определение свободного трийодтиронина (св.Т3) в сыворотке крови осуществляли методом энзим-связанного иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием тест-систем «ДС-ИФА-ТИРОИД-Т3свободный» (ООО «НПО «Диагностические системы», Россия), референсный интервал 2,14–6,42 пмоль/л. Уровень антител к рТТГ оценивался методом ИФА при помощи стандартного набора Medizym T.R.A. (Medipan Diagnostica, Германия), рекомендованная точка разделения (cut-off) — 1,5 мЕд/л («­серая» зона 1–1,5 мЕд/л). Ультразвуковое исследование щитовидной железы проводилось при помощи аппаратаPhilips iU22 xMatrix (США) с линейным датчиком 7,5 МГц. Увеличенным считался объем железы, превышающий 18 мл, рассчитанный по формуле J. Brunn. Интенсивность внутреннего кровотока железы оценивалась в режиме цветового доплеровского картирования (ЦДК).

Нейтрофильные гранулоциты выделяли из цельной гепаринизированной крови центрифугированием в двойном градиенте плотности фиколл-урографина: ρ=1,077 г/см3 — для отделения лимфоцитов, ρ=1,119 г/см3 — для выделения нейтрофилов. Оценку спонтанной и зимозан-индуцированной хемилюминесценции осуществляли в течение 90 мин на 36-канальном хемилюминесцентном анализаторе «БЛМ-3607» (ООО «МедБиоТех», Красноярск) [10]. Реактивность нейтрофилов периферической крови была охарактеризована следующими показателями: время выхода на максимум (Тmax — скорость развития хемилюминесцентной реакции), максимальное значение интенсивности (Imax — максимальный уровень синтеза активных форм кислорода (АФК)) и площадь под кривой хемилюминесценции (S — суммарный синтез АФК за 90 мин измерения). В качестве индикаторов хемилюминесцентной реакции использовали люцигенин (реакция светоизлучения только при взаимодействии ссупероксид-радикалом) и люминол (реакция светоизлучения при взаимодействии со всеми АФК).

С помощью биолюминесцентного анализа в нейтрофилах периферической крови определяли активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г6ФДГ), глицерол-3-фосфатдегидрогеназы (Г3ФДГ), NADP-зависимой декарбоксилирующей малатдегидрогеназы (NADP-МДГ), NAD- и NADH-зависимой реакции лактатдегидрогеназы (ЛДГ и NADH-ЛДГ), NAD- и NADH-зависимой реакции малатдегидрогеназы (МДГ и NADH-МДГ), NADP- и NADPH-зависимой глутаматдегидрогеназы (NADP-ГДГ иNADPH-ГДГ), NAD- и NADH-зависимой глутаматдегидрогеназы (NAD-ГДГ и NADH-ГДГ), NAD- и NADP-зависимых изоцитратдегидрогеназ (NAD-ИЦДГ и NADP-ИЦДГ соответственно) и глутатионредуктазы (ГР). Активность исследуемых дегидрогеназ выражали вферментативных единицах (1Е=1 мкмоль/мин на 104 клеток). Исследование проводили на ферментативном препарате NAD(P): FMN оксидоредуктаза-люцифераза из Photobacterium leiognathi (полученном в Институте биофизики СО РАН, г. Красноярск). Измерение активности ферментов осуществляли на 36-канальном биохемилюминесцентном анализаторе «БЛМ-3607» (ООО «МедБиоТех», Россия).

Статистический анализ

Описание полученных данных производили с помощью подсчета медианы (Ме) и интерквартального размаха в виде 1 и 3 квартилей (Q1–Q3), а также в виде средних арифметических значений и стандартных отклонений от среднего (М±SD) в случае нормального распределения показателей. Для определения характера распределения полученных данных использовали критерий Шапиро–Уилка. Достоверность различий между исследуемыми показателями оценивали по непараметрическому критерию Манна–Уитни (Mann–Whitney U-test). Для исследования силы взаимосвязей показателей вычислялся коэффициент ранговой корреляции по Спирмену (Spearman rank R). Статистический анализ осуществляли в пакете прикладных программ Statistica 8.0 (StatSoftInc., 2007).

Этическая экспертиза

Протокол исследования рассмотрен и одобрен локальным этическим комитетом ФГБОУ ВО «Красноярский государственный медицинский университет им/ профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого» Минздрава России (протокол № 72/2016 от 09.11.2016) и КГБУЗ «Краевая клиническая больница» (протокол № 124 от 07.04.2016).

РЕЗУЛЬТАТЫ

В проспективное исследование были включены 126 женщин с лабораторно подтвержденной БГ в возрасте от 18 до 65 лет. Все пациенты наблюдались в Клинике эндокринологического центра КГБУЗ «Краевая клиническая больница» с дебюта заболевания. При верификации БГ манифестный гипертиреоз диагностировали у 108 (85,71%), субклинический гипертиреоз — у 18 (14,28%) пациентов, соответственно ТТГ=0,01 мЕд/л (0,002– 0,05), свТ3=6,79 пмоль/л (5,91–8,94), свТ4=21,52 пмоль/л (19,21–32,37) и ТТГ=0,04 мЕд/л (0,003–0,01), свТ3=4,12 пмоль/л (2,31–5,43), свТ4=15,01 пмоль/л (10,81–17,33). Медиана уровня антител к рТТГ у обследованных пациентов с БГ статистически значимо не отличалась в зависимости от степени тяжести гипертиреоза на момент манифестации заболевания и составила 15,29 мЕд/л (9,21–24,52). При оценке ультразвуковых характеристик тиреоидной паренхимы как у пациентов с манифестным, так и с субклиническим гипертиреозом визуализировалась диффузно неоднородная структура щитовидной железы с участками повышенной и пониженной эхогенности и усиленным кровотоком при ЦДК, общий объем железы составил 32,01 мл (20,41–50,61). Хемилюминесцентная и энзиматическая активность нейтрофилов крови у обследуемых пациентов на момент верификации БГ не различалась в зависимости от последующей компенсации гипертиреоза и характеризовалась сокращением времени реагирования на стимул (Тmax) люцигенин-зависимой зимозан-индуцированной хемилюминесценции и увеличением интенсивности образования вторичных АФК в ходе люминол-зависимой спонтанной и зимозан-индуцированной реакции, а также внутриклеточным повышением активности Г6ФДГ, ингибированием анаэробного гликолиза и стимуляцией субстратного потока по циклу трикарбоновых кислот.

Всем пациентам сразу после верификации заболевания инициирована консервативная терапия тиамазолом по стандартному протоколу с последующим переводом на постоянный прием поддерживающей дозы тиреостатика. При динамическом наблюдении через 6 нед после инициации тиреостатической терапии у всех пациентов диагностировался медикаментозный эутиреоз: ТТГ=0,67 мЕд/л (0,42– 2,83), свТ3=4,79 пмоль/л (2,15–5,61), свТ4=12,63 пмоль/л (10,23–17,37). При контрольном обследовании через 3 мес от момента начала тиреостатической терапии при приеме поддерживающей дозы тиреостатика у 93 (73,81%) пациентов с БГ определялся стойкий медикаментозный эутиреоз, у 33 (26,19%) пациентов был диагностирован рецидив тиреотоксикоза.

При проведении клинико-иммунологического обследования все пациенты были разделены на две группы в зависимости от компенсации гипертиреоза (табл. 1). Группу контроля составили 65 практически здоровых женщин.

Таблица 1. Клинико-гормональная характеристика пациентов с болезнью Грейвса в зависимости от компенсации гипертиреоза, Ме (Q1–Q3)

Показатели

Контроль

Пациенты с болезнью Грейвса

Компенсированный гипертиреоз

Некомпенсированный гипертиреоз (рецидив)

n=65

n=93

n=33

1

2

3

Возраст, лет (M ± SD)

42,02 ± 12,03

43,02 ± 13,03

40,93 ± 12,17

Поддерживающая доза тиамазола на момент обследования, мг

-

10,0
(10–15)

10,0
(10–15)

ТТГ, мЕд/л

1,13
(0,86–1,51)

2,72
(1,55–3,64)
p1=0,003

0,11
(0,008–0,39)
p1,2<0,001

свТ3, пмоль/л

3,07
(1,61–4,53)

2,15
(1,68–2,92)
p1=0,024

5,62
(4,38–7,38)
p1=0,021

свТ4, пмоль/л

13,10
(11,28–14,80)

15,12
(10,72–17,64)
p1=0,021

20,89
(17,32–25,55)
p1,2<0,001

Антитела к рТТГ, МЕ/л

0,14
(0,16–0,42)

0,33
(0,11–1,12)
p1=0,031

0,51
(0,38–5,84)
p1=0,030
p2=0,040

Объем щитовидной железы, мл

7,51
(7,11−10,63)

24,72
(19,41–31,69)
p1<0,001

27,81
(19,31–44,61)
p1,2<0,001

Примечание. p1 ― статистически значимые различия с контрольными величинами; p2 ― статистически значимые различия с показателями пациентов с компенсированным гипертиреозом. свТ4 ― свободный тироксин; свТ3 ― свободный трийодтиронин; рТТГ ― рецептор тиреотропного гормона.

Несмотря на положительную динамику снижения циркулирующих антител к рТТГ при лечении тиамазолом, их титр оставался статически значимо повышен относительно контроля, независимо от компенсации гипертиреоза. Обращает на себя внимание, что пациенты обеих групп не различались по поддерживающей дозе тиреостатика.

Оценка параметров спонтанной и индуцированной люцигенин- и люминол-зависимой хемилюминесценции позволила обнаружить выраженные изменения показателей активности NADPH-оксидазы и синтеза вторичных АФК у пациентов с БГ, в том числе и при рецидиве гипертиреоза (табл. 2).

Таблица 2. Хемилюминесцентная активность нейтрофилов крови у пациентов с болезнью Грейвса в зависимости от компенсации гипертиреоза (Ме, Q1–Q3)

Показатели

Контроль

Компенсированный гипертиреоз

Некомпенсированный гипертиреоз (рецидив)

n=65

n=93

n=33

1

2

3

Ме

С25–С75

Ме

С25–С75

Ме

С25–С75

Спонтанная люцигенин-зависимая хемилюминесценция

Tmax, с

2083

1407–2881

1743

1740–2297

1663

1442–2273

Imax, о.е. × 103

7,53

2,55–16,54

5,74

2,43–15,50

7,01

2,36–18,38

S, о.е. × с × 105

4,11

1,06–11,33

11,70

10,40–50,76

87,71

36,11–205,22

 

р1=0,008

р1<0,001
р2=0,039

Зимозан-индуцированная люцигенин-зависимая хемилюминесценция

Tmax, с

1737

1386–2331

1362

910–1584

1397

1041–1797

 

р1=0,048

р1=0,047

Imax, о.е. × 103

14,12

7,46–28,96

10,39

1,27–15,98

17,89

5,21–26,59

S, о.е. × с × 105

6,85

2,94–17,81

39,72

18,18–114,56

174,22

75,38–232,48

 

р1<0,001

р1<0,001
р2=0,014

Sинд./Sспонт.

1,77

1,17–3,11

2,20

1,33–4,23

2,17

1,78–3,50

Спонтанная люминол-зависимая хемилюминесценция

Tmax, с

969

567–1559

2096

1809–2136

1169

595–1792

 

р1=0,005

р2=0,029

Imax, о.е. × 103

10,83

4,06–30,88

24,83

7,25–35,59

48,06

14,50–88,28

   

р1=0,002

S, о.е. × с × 105

4,11

1,24–14,04

127,44

24,10–305,28

915,80

57,45–1846,00

 

р1<0,001

р1<0,001
р2=0,021

Зимозан-индуцированная люминол-зависимая хемилюминесценция

Tmax, с

1072

796–1459

764

737–977

1309

722–1645

Imax, о.е. × 103

21,25

7,55–62,59

151,89

26,83–152,95

121,45

83,98–168,22

 

р1=0,039

р1<0,001

S, о.е. × с × 105

6,71

2,54–23,20

741,60

136,80–1602,00

2420,5

193,15–6302,50

 

р1<0,001

р1<0,001

Sинд./Sспонт.

1,89

1,34–2,87

5,25

3,89–5,82

2,65

1,63–4,04

 

р1<0,001

р2=0,033

Примечание. p1 — статистически значимые различия с контрольными величинами; p2 — статистически значимые различия с показателями пациентов с компенсированным гипертиреозом. Tmax — скорость развития хемилюминесцентной реакции; Imax — максимальный уровень синтеза АФК; S — суммарный синтез АФК за 90 минут измерения; Sинд./Sспонт. — соотношение суммарного синтеза АФК за 90 минут измерения при индуцированной и спонтанной хемилюминесценции.

При исследовании активности спонтанной люцигенин-зависимой хемилюминесценции нейтрофильных гранулоцитов обнаружено, что независимо от компенсации гипертиреоза у пациентов с БГ повышается площадь под хемилюминесцентной кривой. Причем при некомпенсированном гипертиреозе показатель суммарного синтеза АФК значительно возрастает как относительно контрольного диапазона, так и относительно значений, установленных у пациентов с компенсированным гипертиреозом. Похожая кинетика хемилюминесцентного ответа наблюдалась и при зимозан-индуцированной люцигенин-зависимой хемилюминесценции, в ходе которой зафиксировано повышение в 4,35 раза площади хемилюминесценции у пациентовс некомпенсированным гипертиреозом в сравнении с показателем суммарного синтеза АФК у пациентов с БГ в состоянии медикаментозного эутиреоза. Независимо от степени компенсации гипертиреоза у пациентов с БГ снижено время выхода намаксимум люцигенин-зависимой зимозан-индуцированной хемилюминесценции.

При исследовании параметров спонтанной люминол-зависимой хемилюминесценции нейтрофилов обнаружено, что у пациентов с компенсированным гипертиреозом увеличиваются время выхода на максимум и площадь под хемилюминесцентной кривой. При некомпенсированном гипертиреозе сокращается время выхода на максимум при увеличении в 7,21 раза показателя суммарного синтеза АФК относительно значений, установленных в группе пациентов с БГ в состоянии медикаментозного эутиреоза. При антигенной стимуляции нейтрофилов у пациентов обеих групп обнаружено повышение интенсивности и площади хемилюминесценции. Причем при некомпенсированном гипертиреозе зафиксировано более чем десятикратное увеличение суммарного синтеза АФК относительно контрольных значений, но не выявлены статически значимые различия с показателями пациентов с БГ в состоянии медикаментозного эутиреоза.

Более выраженное повышение интенсивности стимулированной люминол-зависимой хемилюминесценции определяет увеличение индекса соотношения суммарного синтеза АФК в ходе спонтанной и индуцированной хемилюминесценции (Sинд./Sспонт.) у пациентов с компенсированным гипертиреозом. В то же время наблюдаемое снижение Sинд./Sспонт. у пациентов с некомпенсированным гипертиреозом в сравнении с показателями пациентов с БГ в состоянии медикаментозного эутиреоза при дополнительной индукции «респираторного взрыва» с помощью опсонизированного зимозана характеризует отсутствие метаболических резервов для функциональной активации нейтрофилов.

Исследование уровней активности NAD- и NADP-зависимых дегидрогеназ нейтрофилов у пациентов с БГ в зависимости от компенсации гипертиреоза позволило установить выраженные изменения относительно контрольных значений (табл. 3).

Таблица 3. Активность NAD- и NADP-зависимых дегидрогеназ в нейтрофилах крови (мкЕ) у пациентов с болезнью Грейвса в зависимости от компенсации гипертиреоза (Ме, Q1–Q3)

Показатели

Контроль

Компенсированный гипертиреоз

Некомпенсированный гипертиреоз (рецидив)

n=65

n=93

n=33

1

2

3

Ме

Q1–Q3

Ме

Q1–Q3

Ме

Q1–Q3

Г6ФДГ

0,89

0,01–4,18

4,57

2,24–14,47

19,30

7,59–70,50

 

р1=0,042

р1<0,001
р2=0,030

Г3ФДГ

0,32

0,11–1,72

0,11

0,05–0,22

0,24

0,13–1,40

ЛДГ

10,90

2,89–50,65

3,88

0,36–8,31

15,25

3,07–69,73

 

р1=0,020

р2=0,033

NADP-МДГ

0,03

0,01–1,86

2,05

1,00–3,56

9,11

0,09–44,06

 

р1=0,043

р1=0,009
р2=0,045

NADP-ГДГ

0,16

0,01–2,31

3,09

1,84–9,35

2,63

2,52–17,77

 

р1=0,007

р1=0,015

NADP-ИЦДГ

1,35

0,00–5,88

10,70

4,98–27,13

20,52

4,39–41,95

 

р1=0,008

р1=0,003

МДГ

1,95

0,10–9,80

5,44

2,91–15,19

5,46

1,96–17,71

 

р1=0,044

р1=0,045

NAD-ГДГ

0,67

0,01–4,60

2,29

1,60–5,47

3,59

1,13–14,50

 

р1=0,047

р1=0,030

NAD-ИЦДГ

0,11

0,05–1,65

0,59

0,18–1,11

0,14

0,03–0,75

NADH-ЛДГ

2,39

0,46–18,88

42,63

17,63–78,76

53,06

22,79–82,31

 

р1<0,001

р1<0,001

NADH-МДГ

15,80

3,67–55,78

61,25

20,87–76,15

86,51

20,01–151,93

 

р1=0,045

р1=0,016

ГР

2,14

0,85–6,68

4,38

2,43–10,51

1,85

0,39–9,69

NADH-ГДГ

5,98

0,02–16,39

14,20

2,67–31,95

51,65

25,89–67,34

   

р1=0,008
р2=0,024

NADPH-ГДГ

12,48

2,00–21,40

16,52

2,70–25,38

9,00

4,50–17,95

Примечание. p1 — статистически значимые различия с контрольными величинами; p2 — статистически значимые различия с показателями пациентов с компенсированным гипертиреозом. Г6ФДГ — глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа; Г3ФДГ — глицерол-3-фосфатдегидрогеназа; NADP-МДГ — NADP-зависимая декарбоксилирующая малатдегидрогеназа; ЛДГ и NADH-ЛДГ — NAD- и NADH-зависимые реакции лактатдегидрогеназы; МДГ и NADH-МДГ — NAD- и NADH-зависимые реакции малатдегидрогеназы; NADP-ГДГ и NADPH-ГДГ — NADP- и NADPH-зависимые глутаматдегидрогеназы; NAD-ГДГ и NADH-ГДГ — NAD- и NADH-зависимые глутаматдегидрогеназы; NAD-ИЦДГ и NADP-ИЦДГ — NAD- и NADP-зависимые изоцитратдегидрогеназы.

Независимо от компенсации гипертиреоза в нейтрофилах у пациентов с БГ повышена активность исследуемых NAD-зависимых оксидоредуктаз (NAD-ГДГ и МДГ), вспомогательных дегидрогеназных реакций (NADP-ГДГ и NADP-ИЦДГ) и NADH-зависимых реакций (NADH-ЛДГ и NADH-МДГ). Изучение активности NAD(P)-зависимых дегидрогеназ нейтрофилов показало, что независимо от степени компенсации гипертиреоза у пациентов с БГ выявлен высокий уровень активности Г6ФДГ, а также шунтирующей реакции NADP-МДГ. Причем у пациентов с рецидивом заболевания активность Г6ФДГ и NADP-МДГ возрастала не только относительно контроля, но и ферментативных единиц активности, установленных в группе пациентов с медикаментозным эутиреозом. Сравнительный анализ уровней активности NAD- и NADP-зависимых дегидрогеназ нейтрофилов крови в зависимости от степени компенсации гипертиреоза у пациентов с БГ позволил также отметить, что группы медикаментозного эутиреозаи рецидива заболевания имели различия по уровню активности ЛДГ и NADH-ГДГ. Высокая активность аэробной реакции ЛДГ у пациентов с рецидивом гипертиреоза статистически значимо возрастала относительно значений активности фермента, установленных в группе пациентов с медикаментозным эутиреозом, но не отличалась от контрольных показателей. Характерной особенностью пациентов с рецидивом гипертиреоза также было изменение активности NADH-ГДГ. Высокий уровень активности NADH-ГДГ у пациентов с рецидивом гипертиреоза выявлен как относительно контрольного диапазона, так и показателей, установленных в группе пациентов с БГ в состоянии медикаментозного эутиреоза. Снижение активности ЛДГ отмечалось у пациентов с медикаментозным эутиреозом. При этом активность Г3ФДГ и ГР не изменялись ни в одной из групп пациентов с БГ.

С помощью корреляционного анализа обнаружено, что у пациентов с БГ концентрация свТ4 положительно взаимосвязана с площадью под кривой спонтанной и зимозан-индуцированной люцигенин-зависимой хемилюминесценции: при компенсированном гипертиреозе — соответственно r=0,62, р=0,009 и r=0,58, р=0,014; при некомпенсированном гипертиреозе — соответственно r=0,73, р<0,001 и r=0,72, р<0,001. Только у пациентов с некомпенсированным гипертиреозом обнаружена взаимосвязь между концентрацией свТ4 и Imax спонтанной люминол-зависимой хемилюминесценции (r=0,69, р=0,001). Кроме того, у пациентов обеих групп выявляются положительные корреляции свТ3 с уровнями активности Г6ФДГ и NADP-МДГ в нейтрофилах: при компенсированном гипертиреозе — соответственно r=0,63, р=0,010 и r=0,47, р=0,037; при некомпенсированном гипертиреозе — соответственно r=0,75, р<0,001 и r=0,45, р=0,022. Только при некомпенсированном гипертиреозе установлена связь между концентрацией свТ4 и внутриклеточной активностью МДГ (r=0,52, р=0,021). У пациентов с БГ также выявляются взаимосвязи между активностью ферментов в нейтрофилах и показателями хемилюминесценции. При компенсированном гипертиреозе активность Г6ФДГ положительно коррелирует с Imax спонтанной и S зимозан-индуцированной люцигенин-зависимой хемилюминесценции (r=0,54, р=0,015 и r=0,49, р=0,020 соответственно). При некомпенсированном гипертиреозе уровни активности Г6ФДГ и NADP-ГДГ также положительно взаимосвязаны с S спонтанной люцигенин-зависимой хемилюминесценцией нейтрофилов (r=0,74, р<0,001, в обоих случаев) и Imax спонтанной люминол-зависимой хемилюминесценции (r=0,69, р=0,003 и r=0,65, р=0,005 соответственно). У лиц контрольной группы взаимосвязей между показателями тиреоидного статуса и показателями хемилюминесцентной и метаболической активности нейтрофилов, а также между показателями синтеза АФК и активностью ферментов в нейтрофилах не обнаружено.

ОБСУЖДЕНИЕ

Репрезентативность выборок

Набор когорты пациентов с БГ проводился только в Краевом государственном учреждении здравоохранения, где оказывается специализированная помощь и определяется тактика ведения пациентов с БГ из всех районов Красноярского края.

Сопоставление с другими публикациями

Фундаментальные и клинические исследования последних лет свидетельствуют о том, что избыточная секреция гормонов щитовидной железы при тиреотоксикозе аутоиммунного генеза создает гиперметаболическое состояние, характеризующееся насыщением физиологических антиоксидантных систем за счет высокого потребления внутриклеточного АТФ и кислорода, разобщением дыхательной цепи митохондрий, дисфункция которой способствует выработке АФК в периферических тканях и в щитовидной железе, и вызывает окислительный стресс у пациентов с БГ [11]. При исследованной нами ранее активности респираторного взрыва нейтрофильных гранулоцитов крови у пациентов, не принимающих антитиреоидные препараты, в дебюте БГ было продемонстрировано, что в гипертиреоидную фазу болезни в нейтрофилах крови повышается интенсивность респираторного взрыва за счет синтеза вторичных АФК [12]. Полученные данные согласуются с результатами недавнего исследования окислительного стресса и гомеостаза тиола/дисульфида в периферической крови методом спектрофотометрии у 60 пациентов с впервые выявленной БГ и не принимающих антитиреоидные препараты [13]. Было установлено, что общий антиоксидантный статус, уровень карбонильного белка, индекс окислительного стресса, а также соотношение дисульфид/нативный тиол и дисульфид/общий тиол выше у пациентов с БГ, чем в контрольной группе.

Другое проспективное исследование [14], проведенное также с помощью спектрофотометрического метода, с включением 34 пациентов с впервые выявленным гипертиреозом показало, что концентрация малонового диальдегида в крови влияет на реактивность аутоантител к окислительно-модифицированной каталазе, способствуя нарушению антиоксидантного профиля и прогрессированию аутоиммунного воспаления при БГ.

Имеются единичные публикации исследований, проведенных у пациентов с БГ до и в динамике лечения антитиреоидными препаратами, которые демонстрируют, что уже через 3 мес после тиреостатической терапии ингибируется образование кислородных радикалов и снижается экспрессия отрицательного регуляторного белка остеопонтина [15]. В то же время другие авторы обнаружили увеличение уровней супероксиддисмутазы и каталазы в плазме крови у пациентов с БГ с короткой продолжительностью (1–2 мес) лечения метимазолом по сравнению со здоровыми субъектами, при этом ожидаемое увеличение антиоксидантных ферментов не происходило, напротив, уровни глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы были снижены [16]. При этом до сих пор отсутствуют исследования количественной оценки пула первичных и вторичных АФК, а также кинетики их образования в зависимости от компенсации гипертиреоза при консервативном лечении БГ, что представляется особенно значимым в клиническом аспекте поддержания аутоиммунного воспаления при рецидиве заболевания.

Известно, что люцигенин окисляется и люминесцирует только под влиянием супероксид-радикала, который определяется как первичная АФК и синтезируется в системе NADPH-оксидазы [17]. У пациентов с БГ независимо от компенсации гипертиреоза активность NADPH-оксидазного комплекса уже в состоянии относительного покоя нейтрофилов характеризуется как повышенная. Причем при дополнительной индукции «респираторного взрыва» с помощью опсонизированного зимозана остается повышенной как у пациентов с БГ в состоянии медикаментозного эутиреоза, так и при некомпенсированном гипертиреозе. Сокращение времени выхода на максимум на фоне антигенной стимуляции нейтрофилов (зимозан-индуцированная люцигенин-зависимая хемилюминесценция) у пациентов с БГ характеризует наличие резервной способности метаболической системы клеток к повышению уровня продукции супероксид-радикала независимо от компенсации гипертиреоза. Следует отметить, что после индукции хемилюминесцентного ответа нейтрофилов у пациентов с некомпенсированным гипертиреозом (рецидив заболевания) опсонизированным зимозаном не только замедляется время реагирования на стимул, но и еще больше возрастает суммарное количество продуцируемых первичных и вторичных АФК в сравнении с пациентами с БГ в состоянии медикаментозного эутиреоза. В то же время у пациентов с некомпенсированным гипертиреозом в нейтрофилах отмечена более интенсивная, чем у пациентов с компенсированным гипертиреозом, продукция вторичных АФК, что свидетельствует о высокой цитотоксической активности нейтрофилов в гипертиреоидную фазу БГ.

С помощью корреляционного анализа также показано, что если при компенсированном гипертиреозе свТ4 стимулирует только активность NADPH-оксидазы, то при некомпенсированном гипертиреозе данный гормон стимулирует синтез и первичных,и вторичных АФК. Можно предположить, что у пациентов с компенсированным гипертиреозом иммуномодулирующие эффекты тиамазола реализуются по двум механизмам: ликвидация тиреотоксикоза и ингибирование образования первичных и вторичных свободных радикалов на фагоцитирующих клетках иммунной системы. Но, видимо, последний выражен слабо, так как купирование гипертиреоза не сопровождалось восстановлением параметров оксидативного стресса до контрольных значений.

Высокий уровень продукции АФК нейтрофилами у пациентов с БГ определяется особенностями их внутриклеточного метаболизма. Так, у пациентов с БГ в нейтрофилах повышена активность всех исследуемых NADP-зависимых ферментов. Именно повышенный уровень синтеза NADPH в различных метаболических процессах и является основой для активации NADPH-оксидазного комплекса [18, 19]. Причем у больных с некомпенсированным гипертиреозом активность NADP-зависимых дегидрогеназ в нейтрофилах еще выше, чем у пациентов с компенсированным гипертиреозом. Активность NADPH-оксидазы и синтез первичных АФК у данной категории пациентов будут выше, что мы и доказали с помощью хемилюминесцентного метода. Взаимосвязь между активностью NADP-­зависимых ферментов и уровнем синтеза АФК в нейтрофилах также подтверждается результатами корреляционного анализа. Кроме того, при БГ в нейтрофилах крови меняется активность NAD-зависимых ферментов, функция которых в большей степени ориентирована на энергетические процессы. Так, снижение активности аэробной реакции ЛДГ (только у пациентов с компенсированным гипертиреозом) и увеличение активности анаэробной реакции (вобеих группах больных) данного фермента характеризует повышение интенсивности анаэробного гликолиза и, соответственно, функциональной активности нейтрофилов (в частности, фагоцитоз и формирование внеклеточных ловушек нейтрофилов) [20].

Дополнительно в нейтрофилах пациентов с БГ выявляется повышение уровней активности МДГ, NAD-ГДГ и NADH-МДГ (в обеих группах больных), а также активности NADH-ГДГ (только при некомпенсированном гипертиреозе). Причем более выраженная активация обменных процессов в митохондриальном компартменте (за счет активации NADH-ГДГ) нейтрофилов у пациентов с некомпенсированным гипертиреозом свидетельствует об активации компенсаторных механизмов ингибирования перекисного окисления липидов в гипертиреоидную фазу БГ. Также необходимо отметить, что если у пациентов с компенсированным гипертиреозом свТ3 положительно взаимосвязан с активностью NADP-зависимых дегидрогеназ, то при некомпенсированном гипертиреозе гормоны щитовидной железы положительно коррелируют с уровнями активности и NADP- и NAD-зависимых ферментов.

Клиническая значимость результатов

Зафиксированные закономерности образования свободных радикалов у пациентов с БГ в зависимости от компенсации гипертиреоза существенно дополняют иммунопатогенетическую концепцию адаптации нейтрофилов к системным изменениям тиреоидного статуса при консервативном лечении заболевания. Высокий системный уровень образования первичных и вторичных АФК у пациентов с БГ на фоне поддерживающей дозы тиамазола может являться не только дополнительным индикатором прогрессирования аутоиммунного процесса и рецидива гипертиреоза, но и раскрывает ограничения иммуномодулирующих эффектов антитиреоидных препаратов, определяя мишени этиотропного лечения заболевания.

Ограничения исследования

Уменьшение образования свободных радикалов на фоне тиреостатической терапии играет важную роль в Т-клеточном ответе при БГ, но в то же время может быть тесно связано с ослаблением комплемент-индуцированного повреждения тиреоцитов. Учитывая тесную связь между уровнем АФК и инициацией иммунного ответа, изменения показателей оксидативного стресса необходимо исследовать и в аспекте состояния интратиреоидного иммунитета в зависимости от силы дефекта специфичных регуляторных Т-клеток.

Направления дальнейших исследований

Целесообразными представляются исследования радикал-продуцирующей функции нейтрофилов и моноцитов периферической крови в аспекте ингибирования образования свободных кислородных радикалов в исходе длительной тиреостатическойи радионуклидной терапии БГ, которые могут иметь значение в клинической практике при прогнозировании эффективности длительной консервативной терапии и вероятности рецидива уже в дебюте заболевания.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Установлены особенности метаболических механизмов хемилюминесцентной реакции нейтрофилов у пациентов с БГ при консервативной терапии тиамазолом в зависимости от компенсации гипертиреоза. Обнаружено, что при некомпенсированном гипертиреозе (рецидив заболевания) активированы ферментативные реакции, характеризующие интенсивность анаэробных и аэробных процессов. Нарушения кислородного метаболизма нейтрофилов периферической крови у пациентов в состоянии медикаментозного эутиреоза преимущественно затрагивают первичное звено продукцию супероксидных радикалов, что сопряжено с компенсацией гипертиреоза и иммуносупрессивным эффектом тиамазола. У пациентов срецидивом гипертиреоза отмечаются более выраженные изменения в продукции высокоэнергетических оксидантов не только на начальном этапе окислительных реакций, но и на уровне продукции вторичных АФК, свидетельствующие об активации иммунологических механизмов системного клеточного реагирования. Становится очевидным, что цитопатогенное действие нейтрофилов в генерации АФК при БГ может быть одним из векторов патогенетического лечения заболевания.

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ИНФОРМАЦИЯ

Согласие пациентов. Все исследования выполнены с информированного согласия испытуемых и в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2013 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. № 266.

Источники финансирования. Исследование выполнено при финансовом обеспечении и ресурсах лаборатории молекулярно-клеточной физиологии и патологии Федерального исследовательского центра «Красноярский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук», обособленное подразделение «НИИ медицинских проблем Севера», Красноярск, Российская Федерация.

Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с содержанием настоящей статьи.

Участие авторов. Дудина М.А. — получение, анализ данных, интерпретация результатов, написание статьи; Савченко А.А. — концепция и дизайн исследования, внесение в рукопись существенной (важной) правки с целью повышения научной ценности статьи; Догадин С.А. — концепция и дизайн исследования, внесение в рукопись существенной (важной) правки с целью повышения научной ценности статьи; Гвоздев И.И. — получение и интерпретация результатов.

Все авторы одобрили финальную версию статьи перед публикацией, выразили согласие нести ответственность за все аспекты работы, подразумевающую надлежащее изучение и решение вопросов, связанных с точностью или добросовестностью любой части работы.

Список литературы

1. Chung JH. Antithyroid Drug Treatment in Graves’ Disease. Endocrinol Metab (Seoul). 2021;36(3):491-499. doi: https://doi.org/10.3803/EnM.2021.1070

2. Faustino LC, Kahaly GJ, Frommer L, et al. Precision Medicine in Graves’ Disease: CD40 Gene Variants Predict Clinical Response to an Anti-CD40 Monoclonal Antibody. [Internet]. Front Endocrinol (Lausanne). 2021 Jun [cited 2021 Jun 4]: [about 7 p.]. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC8212124/

3. Kahaly GJ. Management of Graves Thyroidal and Extrathyroidal Disease: An Update. J Clin Endocrinol Metab. 2020;105(12):3704-3720. doi: https://doi.org/10.1210/clinem/dgaa646

4. Subekti I, Kartiko GJ, Suhardi ZF, et al. Serum TSH level as predictor of Graves’ disease recurrence following antithyroid drug withdrawal: A systematic review. [Internet]. PLoS One. 2021 Jan [cited 2021 Jan 29]: [about 17 p.]. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7845983/

5. Lane LC, Cheetham TD, Perros P, et al. New Therapeutic Horizons for Graves’ Hyperthyroidism. Endocr Rev. 2020;41(6):873-884. doi: https://doi.org/10.1210/endrev/bnaa022

6. Morshed SA, Davies TF. Understanding Thyroid Cell Stress. [Internet]. J Clin Endocrinol Metab. 2020 Nov. [cited 2020 Nov 11]. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7047584/

7. Lanzolla G, Marcocci C, Marinò M. Oxidative Stress in Graves Disease and Graves Orbitopathy. Eur Thyroid J. 2020;9(1):40-50. doi: https://doi.org/10.1159/000509615

8. 8. Aslan M, Cosar N, Celik H, et al. Evaluation of oxidative status in patients with hyperthyroidism. Endocrine. 2011;40(2):285–289. doi:10.1007/s12020-011-9472-3

9. https://rae-org.ru/ [Internet]. Российская Ассоциация Эндокринологов. Доступно по ссылке: https://raeorg.ru/system/files/documents/pdf/kr_versiya_3.0_fin_otredaktirovan_16.05.2021g.pdf. Ссылка активна на: 16.05.2021.

10. Савченко А.А., Кудрявцев И.В., Борисов А.Г. Методы оценки и роль респираторного взрыва в патогенезе инфекционно-воспалительных заболеваний // Инфекция и иммунитет. — 2017. — Т. 7. — №4. — С. 327-340. doi: http://dx.doi.org/10.15789/2220-7619-2017-4-327-340

11. Diana T, Daiber A, Oelze M, et al. Stimulatory TSHReceptor Antibodies and Oxidative Stress in Graves Disease. J Clin Endocrinol Metab. 2018;103(10):3668-3677. doi: https://doi.org/10.1210/jc.2018-00509

12. Догадин С.А., Дудина М.А., Савченко А.А., и др. Активность респираторного взрыва нейтрофильных гранулоцитов крови в дебюте болезни Грейвса // Проблемы эндокринологии. — 2017. — Т. 63. — №1. — С. 4-8. doi: https://doi.org/10.14341/probl20176314-8

13. Agan V, Celik H, Eren MA, et al. An Investigation of Oxidative Stress and Thiol/Disulphide Homeostasis in Graves’ Disease. [Internet]. Medicina (Kaunas). 2019 Jun [cited 2019 Jun 14]: [about 18 p.]. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6630526/

14. Gargouri B, Mseddi M, Mnif F, et al. Oxidative stress enhances the immune response to oxidatively modified catalase enzyme in patients with Graves’ disease. [Internet]. J Clin Lab Anal. 2020 Oct [cited 2020 Oct 16]: [about 15 p.]. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7031633/

15. Kocak M, Akarsu E, Korkmaz H, et al. The effect of antithyroid drugs on osteopontin and oxidative stress in Graves’ disease. Acta Endocrinol (Buchar). 2019;15(2):221-224. doi: https://doi.org/10.4183/aeb.2019.221

16. Bednarek J, Wysocki H, Sowiński J. Oxidative stress peripheral parameters in Graves’ disease: the effect of methimazole treatment in patients with and without infiltrative ophthalmopathy. Clin Biochem. 2005;38(1):13-18. doi: https://doi.org/10.1016/j.clinbiochem.2004.09.015

17. Qiao X, Wang L, Wang Y, et al. Intermedin inhibits unilateral ureteral obstruction-induced oxidative stress via NADPH oxidase Nox4 and cAMP-dependent mechanisms. Ren Fail. 2017;39(1):652-659. doi: https://doi.org/10.1080/0886022X.2017.1361839

18. Martínez-Navarro FJ, Martínez-Morcillo FJ, López-Muñoz A, et al. The vitamin B6-regulated enzymes PYGL and G6PD fuel NADPH oxidases to promote skin inflammation. [Internet]. Dev Comp Immunol. 2020 Feb [cited 2020 Feb 29]: [about 18 p.]. Available from: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/s0145305x20300331?via%3dihub#abs0015

19. Parsanathan R, Jain SK. Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase Deficiency Activates Endothelial Cell and Leukocyte Adhesion Mediated Via The TGFΒ/NADPH Oxidases/ROS Signaling Pathway. [Internet]. Int J Mol Sci. 2020 Oct [cited 2020 Oct 8]: [about 9 p.]. Available from: https://www.mdpi.com/1422-0067/21/20/7474

20. Caslin HL, Abebayehu D, Pinette JA, et al. Lactate Is a Metabolic Mediator That Shapes Immune Cell Fate and Function [Internet]. Front Physiol. 2021 Oct [cited 2020 Oct 18]: [About 14 p.]. Available from: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fphys.2021.688485/full


Об авторах

М. А. Дудина
Красноярский государственный медицинский университет им. профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого; Краевая клиническая больница
Россия

Дудина Маргарита Андреевна, к.м.н.

Красноярск, ул. Партизана Железняка, д. 1 

Researcher ID: C-3168-2019

Scopus Author ID: 57192199094

eLibrary SPIN: 4854-1926

 



А. А. Савченко
Красноярский государственный медицинский университет им. профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого; Федеральный исследовательский центр «Красноярский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук», обособленное подразделение «НИИ медицинских проблем Севера»
Россия

Савченко Андрей Анатольевич, д.м.н., профессор 

Researcher ID: S-5099-2016

Scopus Author ID: 7202769821

eLibrary SPIN: 3132-8260

Красноярск



С. А. Догадин
Красноярский государственный медицинский университет им. профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого; Краевая клиническая больница
Россия

Догадин Сергей Анатольевич, д.м.н., профессор 

Researcher ID: P-4467-2015

Scopus Author ID: 6506273878

eLibrary SPIN: 4803-3756

Красноярск



И. И. Гвоздев
Федеральный исследовательский центр «Красноярский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук», обособленное подразделение «НИИ медицинских проблем Севера»
Россия

Гвоздев Иван Игоревич

Researcher ID: Q-5966-2016

Scopus Author ID: 557191107590

eLibrary SPIN: 6203-4651

Красноярск



Дополнительные файлы

Рецензия

Для цитирования:


Дудина М.А., Савченко А.А., Догадин С.А., Гвоздев И.И. Хемилюминесцентная и энзиматическая активность нейтрофилов крови у пациентов с болезнью Грейвса в зависимости от компенсации гипертиреоза. Клиническая и экспериментальная тиреоидология. 2022;18(1):4-14. https://doi.org/10.14341/ket12717

For citation:


Dudina M.A., Savchenko A.A., Dogadin S.A., Gvozdev I.I. The chemiluminescent and enzymatic activity of blood neutrophils in patients with Graves' disease depending on hyperthyroidism compensation. Clinical and experimental thyroidology. 2022;18(1):4-14. (In Russ.) https://doi.org/10.14341/ket12717

Просмотров: 463


ISSN 1995-5472 (Print)
ISSN 2310-3787 (Online)